Среда выделения (200 мл, рН 7.4): маннитол 210 мМ; сахароза 70 мМ; HEPES (N-2-гидроксиэтилперазин–N’-этансульфоновая кислота) 10 мМ. Среду разделяли на три части. В одну 37 мг ЭДТА на 100 мл среды, в другую 45 мкл 0,1 М ЭГТА на 100 мл среды. Третью (три миллилитра) оставляли без изменений.

Все процедуры проводили при 4 °С. Взвешенный физраствор предварительно охлаждали. Затем взвешивали вместе с печенью. Измельчали печень в прессе, затем гомогенизировали, разбавив средой с ЭДТА в девять раз.

Центрифугировали 4 мин при 250 g, затем 6 мин при 600 g. В результате этого осаждались ядра и обрывки мембран.

Супернатант центрифугировали 20 мин при 4500 g.

Осадок ресуспендировали в среде с ЭГТА и центрифугировали 20 мин при 4500 g.

Осадок ресуспендировали в среде без ЭГТА и без ЭДТА в соотношении 100 мкл среды на каждый грамм ткани и ставили в лед.

Это интересно:

Заключение.
Человек, подобно любому другому виду, стремился освоить возможно большее пространство с возможно большей плотностью населе­ния. Однако что-то ему мешало и ограничивало его возможно­сти. Что же? Как бы ни была развита техника, все необход ...

Определение параметров транспорта К+ с помощью К+ -селективного электрода
Ион-селективные электроды позволяют определять концентрацию ионов в растворе, которая зависит от разности потенциалов, возникающей между электродом и электродом сравнения. Среда для К+ - электрода (рН 7.2-7.4): Сахароза 150 мМ; Трис(гидр ...

Терапевтическое клонирование
Клонирование живых существ, несомненно, важнейший технологический и фундаментальный прорыв в биологии репродукции конца ХХI века. Более того, новая технология, которая стремительно утрачивает свою фантастичность, может кардинально изменит ...